Importancia de la elección del Medio de Cultivo
Dentro de la industria farmacéutica hay varios procesos en los que participan Medios de Cultivo. Estos Medios de Cultivo deben cumplir unas exigencias acordes con el medicamento que se va a fabricar. Es decir, si se trata de un producto estéril, debe garantizar que cumple con los requerimientos de fabricación en proceso aséptico, o clase A.
Monitorización ambiental
Un programa de Monitorización Ambiental, bien programado y ejecutado nos permite incrementar el grado de fiabilidad y seguridad en la esterilidad del proceso aséptico. Las operaciones de muestreo, en ningún caso, deben poner en riesgo las operaciones de fabricación.
Este programa fiable y bien ejecutado va a permitir la liberación del lote a tiempo y con garantías. La monitorización de viables de un proceso aséptico incluye la monitorización ambiental y de personal, realizado mediante placas de sedimentación, muestreos volumétricos y muestreos de superficie. Estos últimos se deben realizar con placa de contacto o con swabs, dependiendo de la accesibilidad de la zona.
El programa de monitorización debe establecerse en función de un análisis de riesgos, basado en un conocimiento detallado de todo lo que influye en el proceso:
- Todo lo que influye en el proceso
- Instalaciones
- Equipamientos
- Operaciones implicadas
- Producto final
- Procesos específicos
- Datos históricos de monitorización
- Datos obtenidos durante la cualificación.
Es fundamental para establecer la estrategia del análisis de riesgos tener en cuenta cada proceso, cada instalación y cada material
Es asimismo de vital importancia la fiabilidad del dato que resulta, y en esto tiene una implicación directa el Medio de Cultivo utilizado.
Por ello, hay que hacer hincapié en el riesgo que supone la utilización del Medio de Cultivo correcto, con las máximas garantías, e incluso evaluar si el proveedor del Medio de Cultivo cumple las expectativas de suministro, dado el riesgo que supone la posibilidad de desabastecimiento de este material.
Medios de Cultivo ¿Qué debemos tener en cuenta?
No debemos perder de vista que las placas utilizadas para la monitorización ambiental entran dentro de las salas de producción estéril y están presentes durante todo el proceso. Entonces, estas no deben suponer un riesgo para el producto, ni para los resultados de monitorización del proceso, por lo que la calidad y la garantía de esterilidad debe ser acorde a la sala en la que se va a utilizar, Clase A.
En consecuencia, debemos plantearnos varias preguntas respecto al medio de cultivo:
¿Qué impacto puede tener una contaminación en una de las placas?
En las placas que se van a utilizar para garantizar el proceso aséptico, pero la pregunta se puede hacer extensible a las que se van a utilizar para probar la esterilidad del producto final.
¿Podemos garantizar la esterilidad del embalaje cuando entran en zona aséptica?
La consecuencia de no tener en cuenta estos aspectos puede llevar a introducir una contaminación en la zona, obtener falsos positivos, o bien falsos negativos, y con esto cuestionar los resultados. Asimismo, puede llevar investigaciones y desviaciones, retrasos en la producción y liberación de lotes, pérdida de lotes. Y llevado al extremo, pérdida de prestigio y comentarios durante las auditorías.
En general los Medios de Cultivo no pueden recibir altas dosis de gamma irradiación, entre 9 y 20Kgy, porque lo desestabiliza y pierde características de fertilidad. Por eso es importante partir de un bioburden cuanto más bajo mejor; lo ideal sería elegir un proveedor que produzca los Medios de Cultivo con las mismas garantías que las salas de fabricación. Deberían ser producidos en un entorno de clase A.
Otro de los puntos a tener en cuenta es la capacidad de crecimiento del medio de cultivo. El Growth Promotion Test (GPT, Test de Promoción del Crecimiento) es la herramienta utilizada para determinar si el medio de cultivo es óptimo. Una de las cosas que hay que contemplar es que no todos los fabricantes son iguales, hay una alta variabilidad entre las diferentes marcas. El GPT va a decidir si el medio de cultivo tiene las características de fertilidad deseadas, de lo contrario, podemos estar obteniendo resultados de Monitorización Ambiental, o de esterilidad, incompletos, resultando una información menos fiable sobre la contaminación.
Según la normativa, el GPT debe realizarse en cada lote de Medio de cultivo, teniendo en cuenta qué se considera un lote. En caso de medios preparados, cada número de lote de fabricación y cada transporte. Para medios deshidratados, cada reconstitución, y lo mismo para medios preparados a partir de componentes.
Para evitar perder material y tiempo en la realización del GPT, sería deseable que el proveedor pudiese garantizar una larga caducidad en el medio de cultivo y así poder unificar los pedidos y las entregas.
El medio de cultivo elegido, por excelencia, para la monitorización es TSA, realizando una doble incubación, una para bacterias a 32-37ºC y otra para hongos a 25ºC. Sin embargo, hay la opción de elegir TSA para el crecimiento de bacterias y SDA como medio específico para hongos y levaduras.
Por otro lado, sería deseable que los Medios de Cultivo pudiesen almacenarse a temperatura ambiente, y no en frío, por dos razones importantes:
Medio de Cultivo frio
Un Medio de Cultivo frio provoca estrés al microorganismo que llega, y no va a crecer naturalmente, puede dar un falso negativo. En cambio, si el Medio de Cultivo se almacena a temperatura ambiente, y hay una contaminación en el entorno monitorizado, se va a detectar con facilidad.
Medio de Cultivo contaminado
Si se ha guardado en frío, no se va a ver hasta que se haya utilizado, por que se está inhibiendo el crecimiento. Y en ese momento se debe determinar si el problema es del medio de cultivo o de la monitorización, con el riesgo, además, de haber introducido una contaminación en zona estéril. Un Medio de Cultivo guardado a temperatura ambiente, si está contaminado, no se está inhibiendo el crecimiento, por lo tanto, se va a detectar antes de utilizarlo y de introducirlo en la zona estéril.
La limpieza y desinfección, necesaria para un correcto control de la contaminación, puede generar residuos de desinfectantes tanto en superficies como en ambiente. Estos residuos, en contacto con el medio de cultivo, puede inhibir el crecimiento de microorganismos dando lugar a falsos negativos y resultados erróneos. Por eso la elección del medio de cultivo debe incluir necesariamente la combinación con neutralizantes de desinfectantes, los dos primeros que se incluyeron fueron Lecitina y Tween 80, y posteriormente Histidina y Thiosulfato.
En principio esta combinación, TSA-LTHT, debería ser suficiente para inactivar todos los residuos de desinfectantes que puedan quedar después del aclarado. Sin embargo, si la concentración de residuos de amonio cuaternario es alta, puede resultar también en falsos negativos, por eso se han desarrollado algunas placas capaces de neutralizar incluso concentraciones altas de estos componentes (TSA-U+).
Por tanto, como hemos podido comprobar, la elección del Medio de Cultivo no solo no es sencilla, sino que es de gran impacto en el resultado final. Por eso es importante evaluar los diferentes aspectos en profundidad, para garantizar que la Monitorización ambiental será fiable, completa y representativa en cuanto a la existencia o no de microorganismos, y su crecimiento en el Medio de Cultivo.
Mª Luz es Licenciada en Biología, especialidad Sanitaria. Posee una amplia experiencia en el sector comercial farmacéutico y ha trabajado durante 9 años como Especialista de Productos Biológicos y Biomateriales dentro de la industria de la prótesis traumatológica.
Desde 2017 desarrolla sus funciones en Tiselab como Técnica Comercial y Product Manager para Microbiología de la Industria Farmacéutica en la Zona Este y Norte de España.