La realización de tests de promoción del crecimiento (GPT) en nuevos lotes de medios es una tarea esencial para todos los laboratorios farmacéuticos de fabricación estéril y no estéril. Su laboratorio realiza GPT con regularidad, pero quizás no está seguro sobre las mejores prácticas que los auditores buscarán cuando inspeccionen sus archivos.

Para ayudarle a preparar su próxima auditoría, hemos revisado los capítulos de la Farmacopea de los EE. UU. (USP) relativos a los GPT. El siguiente resumen incluye los capítulos de USP a los que un auditor puede recurrir al visitar su instalación, junto con los puntos clave y consejos para el laboratorio.

Capítulos de USP sobre microbiología que sirven de referencia durante una auditoría:

  • Los GPT se deben realizar conforme a los capítulos generales <51>, <61>, <62>, <63>, <71> <1117> y <1231> de USP.
  • Los GPT están armonizados con la Farmacopea Europea (Ph. Eur.) y la Farmacopea Japonesa (JP) en los Capítulos <61>, <62> y <71>.

¿Qué dice la USP sobre los GPT?

  • “Se debe comprobar cada lote de medio listo para usar y cada lote de medio preparado a partir de medio deshidratado o de los ingredientes descritos.”
  • “Se deben utilizar suspensiones de cepas de test estables y estandarizadas o prepararlas según lo especificado más abajo.”
  • “No más de cinco pasos a partir del lote de siembra maestro original.” (<61>)
  • “Para medios sólidos, el crecimiento obtenido no debe diferir en un factor mayor de dos del valor calculado para un inóculo estandarizado.” (<61>)
  • “Para un inóculo recién preparado, crecimiento de los microorganismos comparable al obtenido previamente con un lote de medio previamente comprobado y aprobado.”     (<62>)
  • Criterios de aceptación de medio sólido – Promedio del número de colonias del nuevo lote de medio y el número de colonias del lote de medio aprobado          Para el nuevo lote de medio a aprobar, se deben cumplir los        siguientes criterios de aceptación para cada microorganismo comprobado:
  1. El número medio de colonias en el nuevo lote de medio debe ser “comparable” al número medio de colonias del lote aprobado anteriormente. No se establece una definición cuantitativa del término “comparable” en USP, Ph. Eur. ni JP.
  2. Debe haber ≤100 colonias en el control (agar no selectivo). Aunque no lo exige la USP, se recomienda inocular medios selectivos en paralelo con medios no selectivos para determinar la recuperación porcentual comparable entre los medios. El medio selectivo tiene propiedades inhibidoras, por lo que cabe esperar que la recuperación será mucho menor comparada con medios no selectivos. Esto permite ganar tiempo en las investigaciones y en el análisis de causas.
  • “Los medios líquidos son adecuados si hay un crecimiento claramente visibles de los microorganismos comparable al obtenido previamente con un lote de medio previamente comprobado y aprobado.” Para determinar si un nuevo lote de medios líquido es aceptable, pruebe en paralelo el nuevo lote de medios, el lote de medios aprobado anteriormente y el agar no selectivo. El agar no selectivo es necesario para determinar la concentración de UFC del inóculo. El nuevo lote de medios líquidos es aceptable si:
  1. Es comparable en términos de turbidez al lote de medios aprobado anteriormente.
  2. El número de colonias en el agar no selectivo cumple las especificaciones (≤100 colonias al probar las propiedades de promoción del crecimiento).
  • Muchos fabricantes farmacéuticos consideran un “lote” de medios cada vez que se utiliza un nuevo número de lote. Esta suposición es incorrecta. Un “lote” de medios debe definirse como:
  1. Cada vez que se recibe en la instalación un nuevo envío de medio preparado, independientemente del número de lote.
  2. Cada vez que se prepara un nuevo lote de medio a partir de medio de cultivo deshidratado, independientemente del número de lote y de la fecha de recepción.
  • Muchos fabricantes farmacéuticos utilizan un “control positivo” diario en el que inoculan cada tipo de medio utilizado con <100 UFC. Este no es un requisito según la USP.

¿Por qué es importante esta información?

Los medios se compran de una de las dos formas siguientes:

  1. Vertidos previamente o ya reconstituidos de un proveedor. Los fabricantes deben derretir el agar bajo condiciones controladas para evitar daños en los medios. Las condiciones de almacenamiento y envío son vitales para mantener la calidad de los medios hasta la fecha de caducidad. Los factores que se deben tener en cuenta varían entre los distintos tipos de medios:

– Temperatura

– Recipiente (cristal, plástico)

– Humedad

– Luz

Las condiciones de envío pueden dañar la calidad del medio. Sea cual sea el número de lote, el envío debe ser validado para los medios a utilizar en el test de USP a fin de garantizar que el medio no se ha puesto en peligro durante el envío.

El entorno de fabricación y el entorno del usuario final son diferentes, con variabilidad en los métodos, las técnicas, los operarios, las incubadoras, etc. Esto confirma la necesidad de contar con medios de promoción del crecimiento en las instalaciones del usuario final.

  1. Medios deshidratados preparados internamente.Las materias primas (medios deshidratados o componentes) deben almacenarse bajo condiciones apropiadas y controladas.

– Las materias primas deben utilizarse antes de la fecha de caducidad.

– Los medios deshidratados deben precalentarse para disolver el agar, pero no se pueden calentar excesivamente porque se podrían dañar los componentes del agar vulnerables al calor.

– La esterilización de los medios se debe controlar.

Además de su capacidad de promoción del crecimiento, se debe comprobar que los medios no presentan ninguno de los siguientes problemas:

  • Recipientes o tapas agrietados
  • Llenado desigual de los recipientes
  • Deshidratación causante de grietas o superficies abolladas en medios sólidos
  • Hemólisis
  • Oscurecimiento excesivo o cambio de color
  • Formación de cristales por posible congelación
  • Número excesivo de burbujas
  • Contaminación microbiana
  • Status de indicadores de reducción-oxidación (si procede)
  • Número de lote y fecha de caducidad comprobados y registrados
  • Esterilidad de los medios
  • Limpieza de las placas (la tapa no debe pegarse al plato)

 

Consejos clave

Los GPT se realizan para garantizar que los medios utilizados para detectar y enumerar las bacterias son capaces de promover el crecimiento microbiano. La calidad del medio es una de las funciones más cruciales del laboratorio. Asegúrese de que todos los laboratorios definen los “lotes” de medios correctamente y dedican tiempo a realizar los GPT adecuadamente.

 

 

[Post traducido del blog de Microbiologics]